Базовый мониторинг чистых помещений
Целью базового микробиологического мониторинга является отслеживание контаминации воздуха, поверхностей и персонала.
Мониторинг воздуха
Aктивный метод (Пробоотборник воздуха) – известный объем воздуха проходит через или вокруг собирающей среды, в которой задерживаются микроорганизмы. После инкубации устанавливается их количество и пересчитывается на 1 м? воздуха.
Используемые пробоотборники для воздуха:
- Оборудование для отбора проб, работающее по центрифужному принципу – воздух забирается через вращающиеся орбитальные лопасти, которые выталкивают частицы на полоску-вкладыш с культивационной средой. Полоска с агаром затем инкубируется.
- Оборудование для отбора воздуха через желатиновый фильтр – воздух фильтруется через желатиновый фильтр, который затем переносится на чашку с агаром. Желатин растворяется в агаровой среде и чашка инкубируется.
- Оборудование для отбора воздуха просеиванием на агаровую чашку – воздух прогоняется через отверстия в круговой ситообразной пластинке и осаждается на поверхности агаровой чашки, после экспозиции чашка инкубируется (см. рисунок).
Преимущество: Можно проверить определенный объем воздуха.
Недостаток: С началом работы прибора нарушается ламинарный поток воздуха, что является неблагоприятным моментом для критических мест. Не охватывает всю операцию – пробоотбор проводится одноразово в ходе рабочей операции в контролируемом помещении.
Пассивный метод (Седиментационные чашки) – заключается в выдерживании седиментационных чашек с агаровой культивационной средой в течение определенного времени. После инкубации подсчитывается количество колоний. Рекомендуемое время экспозиции – 4 часа, при этом необходимо проверить ростовые свойства чашек после установленного времени открытия. В определенной среде чашки могут высыхать быстрее и в связи с этим теряют способность обеспечивать рост микроорганизмов.
Пробоотбор проводится в течение всего времени асептического наполнения в контролируемом помещении, по прошествии определенного времени чашки заменяются. Рекомендуется, чтобы чашки заменяли сами операторы, во избежание входа в помещение дополнительного персонала как потенциального источника контаминации.
Преимущество: минимальное вмешательство в критические рабочие точки.
Недостаток: количество исследованного воздуха неизвестно.
Точки пробоотбора – должны размещаться в критических местах в классе чистоты A, а в классах B, C, D прежде всего в местах интенсивного передвижения персонала или материалов — в шлюзах. В классе A пробоотбор не должен мешать рабочему процессу.
Мониторинг поверхностей и персонала
Мазки стерильным тампоном (Swabs) – количественно или качественно. Контролируемая поверхность вытирается увлажненным стерильным тампоном, собранные микроорганизмы переносятся на поверхность агара и инкубируются. Альтернативной возможностью является перенос собранных микроорганизмов в стерильную жидкость, фильтрование, перенос фильтра на агаровую чашку и инкубация.
Преимущество: после отбора пробы исследованную поверхность не нужно дезинфицировать.
Недостаток: захват меньшего количества микроорганизмов.
Контактные чашки или пластины (Contact Plates) – используются агаровые чашки для установления общего количества микроорганизмов и чашки для установления количества грибов.
Необходимо проверять ростовые свойства используемых сред. Если используется только один вид агаровой среды, необходимо проверить способность захватить широкий спектр микроорганизмов, включая грибы. Несмотря на то, что производители предоставляют среды для отпечатков, нейтрализующие дезсредства, необходимо доказать, что отпечатывание дезинфицированной поверхности не окажет влияние на рост микроорганизмов. На практике это означает проверку ростовых свойств на чашках, на которых проводились отпечатки с дезинфицированной поверхности.
Точки отбора проб у персонала:
- отпечатки перчаток (5 пальцев – обе руки)
- отпечатки с рабочей одежды (маска, предплечья, грудь, темя)
Точки отбора проб с оборудования и в помещении
- критические места – там, где оборудование находится в непосредственном контакте с продуктом (например, наполняющие иглы, емкость для пробок, направляющие пазы для резиновых пробок, места, где продукт находится открытым)
- менее критические места – двери и окна шлюза, панели управления, пол, стены, оборудование и т.д. (необходимо выявить оборудование, которое может быть контаминировано персоналом, и точки, где под действием электростатики могут находиться частицы с зарядом, несущие на поверхности микроорганизмы)
Отпечатки с критических точек и одежды персонала берутся непосредственно после окончания асептического наполнения, остальные отпечатки берутся в ходе производственного процесса.
Преимущество: высокий захват микроорганизмов.
Недостаток: после отбора проб необходимо исследованную поверхность продезинфицировать и убрать остатки среды.
Дополнительный мониторинг для асептических производств
Стерильность первичных упаковок
Устанавливается стерильность упаковок (например, флаконов и пробок), которые асептически наполняются инъекционным препаратом. Пробы отбираются случайным методом в зоне наполнения. В микробиологической лаборатории проводится инкубация в жидкой среде и оценивается стерильность. Помутнение среды означает контаминацию, прозрачность среды свидетельствует о стерильности.
Мониторинг нагрузки используемых дезсредств
Имеются в виду дезсредства, используемые для санитации чистых помещений. Отбирается 100 мл дезсредства после окончания санитации, затем фильтруется через стерильный фильтр, далее следует промывание с целью устранения антимикробного влияния отфильтрованного дезсредства. После инкубирования фильтра устанавливается количество образовавшихся колоний. Критерий приемлемости – 0 КОЕ /100 мл, т.е. стерильность.
Мониторинг нагрузки инъекционного раствора перед фильтрацией – Bioburden
Отбирается 100 мл инъекционного раствора перед стерилизацией (у асептического наполнения под стерилизацией понимается фильтрация через фильтр с размером пор 0,22 ?м) в период непосредственно перед окончанием наполнения. Обработка проводится в микробиологической лаборатории. Проба фильтруется через стерильный фильтр, который промывается водным раствором (устранение возможного антимикробного действия отфильтрованного продукта). После инкубации фильтра устанавливается количество образовавшихся колоний. Критерий приемлемости — 10 КОЕ/100 мл. У некоторых препаратов данный лимит предфильтрационной нагрузки является труднодостижимым. Он установлен в документе «GMP Note for Guidance on Manufacture of the finished dosage form» (Апрель 1996) от European Agency for the Evaluation of Medicinal Products.Контролирующие организации настаивают на его выполнении.
Мониторинг стерильности газообразных сред
Контролируется азот и сжатый воздух.
Устанавливается стерильность газа за бактериальным фильтром. Через простерилизованную воду для инъекций, находящуюся в специальном флаконе, в течение определенного времени пропускается исследуемый газ. Вода отфильтровывается и контаминирующие организмы выявляются путем инкубации фильтра на питательном агаре.
Если фирма имеет собственное пробоотборное оборудование для газов, можно установить и микробиологическую нагрузку в определенном объеме воздуха. Альтернативным решением является встраивание в систему расходомера и измерение объема проходящего газа.
Автор: Яна Гаклова (Jana Haklov?), доктор наук, эксперт компании FAVEA
